W无区码一码二码三码,十九岁日本完整免费完整版观看,国产成人精品综合久久久,欧美人与动牲交免费观看

1. 疏水層析的原理：

疏水作用層析（Hydrophobic Interaction Chromatography，HIC）是根據分子表面疏水性差別來(lái)分離蛋白質(zhì)和多肽等生物大分子的一種較為常用的方法。由于蛋白質(zhì)是一類(lèi)有序三維結構的活性大分子，但其空間排列很容易受到外界環(huán)境的影響，極易從有序的結構變成無(wú)序結構。當立體結構發(fā)生變化時(shí)，常常失去原有的活性，即蛋白質(zhì)的失活。使用適度疏水性的分離介質(zhì)，在含鹽的水溶液體系中，借助于分離介質(zhì)與蛋白質(zhì)分子之間的疏水作用達到吸附活性蛋白分子的目的，這種層析技術(shù)稱(chēng)為疏水作用層析。

蛋白質(zhì)的一級結構中有很多非極性氨基酸，這些氨基酸在三級結構上由于疏水相互作用會(huì )被盡量包在分子內部，但是仍不可避免地有一些非極性側鏈暴露在表面，這些非極性的表面是它和疏水層析介質(zhì)作用的結合部位。因為蛋白質(zhì)分子的疏水性不同，它們和疏水層析介質(zhì)的作用力強弱也不同，所以非極性表面的大小和含量決定了蛋白質(zhì)分子的疏水性強弱。疏水層析就是利用各種蛋白質(zhì)分子和疏水功能基團之間作用力的差異對蛋白質(zhì)進(jìn)行分離、純化的一種技術(shù)。

蛋白質(zhì)可以看成是一種有親水性外殼包裹著(zhù)疏水性核心的四級結構的復雜體系。蛋白質(zhì)表面存在一些非極性的疏水基團，這些基團多為非極性的氨基酸殘基。由于各種基團疏水性的差別、疏水基團暴露數量的不同、疏水區與親水區在數量、大小和分布的不同等因素，使各種蛋白質(zhì)之間存在較大的差異，同時(shí)，對于同一種蛋白質(zhì)在不同的溶液中，使疏水基團暴露的程度也呈現出一定的差異。由于這種差異，致使各種蛋白質(zhì)分子與同一種分離介質(zhì)疏水基團的相互作用不同，吸附能力不同，可以達到分離的目的。

如果在水溶液中加入中性鹽，使溶液處于高鹽濃度時(shí)，可以破壞蛋白質(zhì)分子表面水分子的有序排列，使大分子與分離介質(zhì)的功能基團之間產(chǎn)生疏水作用。同時(shí)，由于高鹽的存在，使蛋白質(zhì)分子的疏水基團暴露增多，增加了大分子的疏水性，增強了蛋白質(zhì)分子與分離介質(zhì)功能基團之間的疏水作用，相互結合力增強。在疏水作用的驅動(dòng)下，蛋白質(zhì)分子從溶液中被吸附到分離介質(zhì)上，改變了蛋白質(zhì)分子在水相與分離介質(zhì)相中的分配系數，達到了吸附的目的。

在目標產(chǎn)物被分離介質(zhì)吸附后，使用低鹽含量的溶液通過(guò)層析柱，降低了蛋白大分子與分離介質(zhì)之間的疏水作用，使目標產(chǎn)品脫離分離介質(zhì)，擴散到溶液中，達到洗脫的目的。各種大分子的疏水性強度不同，與分離介質(zhì)之間的疏水作用不同，各有用物質(zhì)根據疏水性的強弱將依次被洗脫，出現不同的洗脫峰，達到多種物質(zhì)分離的目的。

2. 疏水層析的優(yōu)點(diǎn)：

與蛋白質(zhì)作用條件溫和。疏水作用層析只需改變溶液中的鹽含量，就可以進(jìn)行吸附或洗脫。操作條件溫和，蛋白質(zhì)分子結構無(wú)明顯變化，蛋白質(zhì)分子活性回收率高。尤其適用于對環(huán)境比較敏感，分子量較大的蛋白質(zhì)的分離。

選擇性強。在特定鹽濃度下，疏水作用層析介質(zhì)對蛋白質(zhì)的吸附選擇性較強，對于疏水性不同的蛋白，只要改變洗脫鹽的濃度，就可以對蛋白實(shí)現較好的分離。

具有優(yōu)良的物理、化學(xué)穩定性。分離介質(zhì)結構穩定，可以有較長(cháng)的使用壽命，并可長(cháng)期反復使用。

無(wú)環(huán)境污染。疏水作用層析在操作過(guò)程中，只使用鹽的水溶液作流動(dòng)相，除介質(zhì)的再生外很少使用有機溶劑，因此，不會(huì )對環(huán)境造成危害，易于工業(yè)規模生產(chǎn)。

易于和其他層析技術(shù)聯(lián)合使用。疏水作用層析介質(zhì)易于和其他層析技術(shù)聯(lián)合使用，可減少操作步驟，節約生產(chǎn)成本。適用于含鹽量較高，或離子強度較大的溶液中進(jìn)行蛋白質(zhì)的吸附分離。